細(xì)胞培養(yǎng)可以說是整個(gè)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展的核心，培養(yǎng)基的質(zhì)量則是影響細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵因素。在培養(yǎng)基的各種成分中，血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程中外源添加的成分不確定的物質(zhì)，血清的質(zhì)量直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的效果，甚至對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的成敗起著關(guān)鍵性的作用。

所以，選用血清能夠使我們的實(shí)驗(yàn)少走彎路，“*上”。然而，Gibco曾就血清質(zhì)量做過一次調(diào)查，結(jié)果表明：使用者對(duì)血清不正確的儲(chǔ)存與使用方式常常導(dǎo)致了血清質(zhì)量下降，實(shí)驗(yàn)效果不理想。

那么問題來(lái)了：血清在儲(chǔ)存與使用過程中有哪些注意事項(xiàng)？如何才能保證采購(gòu)的血清在儲(chǔ)存過程中不產(chǎn)生質(zhì)量損失呢？

下面我整理了一些Q&A供大家參考：

Q：保存血清推薦的方法?

A：我們建議血清應(yīng)保存在-5 ℃至-20 ℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

Q：如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

A：我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8 ℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

Q：血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?

A：血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但比較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白 (形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400 g 稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。

Q：為什么要熱滅活血清?

A：加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES 細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

Q：有必要做熱滅活嗎?

A：實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是 “小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái)，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

Q：為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?

A：胎牛血清儲(chǔ)存在2-8 ℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量。推薦在-20 ℃儲(chǔ)存胎牛血清，避免反復(fù)凍融。

Q：如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

A：我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作：解凍血清時(shí)請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法 (-20 ℃至4 ℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20 ℃至37 ℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時(shí)請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

關(guān)于血清的儲(chǔ)存與使用，若您還有其他疑問，歡迎在評(píng)論區(qū)留言~

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